标准曲线与吸光度的关系

化学检测分析中常用的一种定量分析的方法就是绘制标准曲线，指的是通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质，而得到的性质的数值曲线，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。

一、标准曲线与吸光度的定义

图1  陕西建声实验室紫外分光光度计检测使用中

1. 标准曲线的定义

标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。与校正曲线不同，它是以标准溶液及介质组成的标准系列，标绘出来的曲线。校正曲线的标准系列的伴生组分必须与试样相匹配，以便测量结果的准确。只有标准曲线与校正曲线相重合的条件下，才可以用标准曲线来代替校正曲线。

2. 吸光度的定义

是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的以10为底的对数（即Lg(I₀/I₁)），其中I₀为入射光强，I₁为透射光强，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等。

二、前期测定注意事项

1、仪器校验好。

2、移取液体体积要精确，保证迅速准确，尽可能用一根移液管；为减小人为差，同一种液体要一个人操作。
3、保证标准品的纯度，所用标准品最好是新打开的，纯度较高的固体或溶液，防止污染。
4、容器要保证洁净。
5、根据标准品理化性质注意加样的先后顺序。
6、如果要测OD值，应保证测前各管液体充分混匀。
7、若还是有某个点误差较大，应舍弃。

8、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

9、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈s型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

10、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

11、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

12、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。

13、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数r至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。

三、标准曲线检测项目

1.精密度检验

标准曲线的精密度检验：精密度检验就是看试验点距离拟合的直线的距离有无异常，所以也称线性检验（拟合检验）。

2.截距检验&斜率检验

标准曲线的截距检验和斜率检验分别考察Y=a+bX中a和b与0的统计学差异，a与0有差别说明有试剂空白或系统误差，而b若与0没差别说明仪器的灵敏度根本达不到分析要求。

图2  陕西建声实验室空气甲醛测定标准曲线绘制

3. 吸光度检验

用标准品配制成不同浓度的标准溶液，测其相应的吸光度值，以标准品的吸光度值作为X 坐标，以浓度为Y 坐标，绘制标准曲线（通常为直线）。用标准品配制成不同浓度的标准溶液，测其相应的吸光度值，用excel制作标准曲线，并用待测浓度的溶液吸光度在标准曲线上求得相应的浓度数值。

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